產(chǎn)品及特點(diǎn)：

諾如病毒（Norwalk Virus）是單股正鏈 RNA 病毒，屬于人類(lèi)杯狀病毒屬，是一種引起非細(xì)菌性急性腸胃炎的病毒，如諾病毒感染性強(qiáng)，以腸道傳播為主，通過(guò)口-糞傳播，以污染的水源、食物、貝類(lèi)、物品、空氣作為主要傳播載體。諾如病毒可分為 G I-G 五個(gè)基因群，其中引起人類(lèi)感染的主要是 G1 和 G2 群。因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品，采用RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)疑似感染動(dòng)物血清或組織中的諾如病毒 G2 型。它具有下列特點(diǎn)：

1.       即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品RNA模板。

2.      提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

3.      產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)諾如病毒 G2 型RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟除此之外的其它病毒RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

4.      RT-PCR mix 中含上樣染料，擴(kuò)增反應(yīng)后可以直接上樣電泳。

5.      本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。

6.      本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn)，不能用于定量。

       7.      本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分：

注：為避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供專(zhuān)一的核酸片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為12個(gè)月。

自備試劑：樣品RNA

使用方法：

一、樣品DNA的制備

1.       如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取反應(yīng)，多出的兩個(gè)中一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL諾如病毒 G2 型PCR陽(yáng)性對(duì)照（1×10E6拷貝/μL，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。

2.      用自選方法純化上述N+2個(gè)樣品的DNA。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌DNA提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置PCR反應(yīng)（20μL體系）

3.      標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的DNA樣品，額外增加的兩個(gè)管一個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照，另一個(gè)用于PCR陰性對(duì)照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：

4.       上機(jī)進(jìn)行PCR，PCR反應(yīng)參數(shù)為:

三、電泳分析

1.       取5-10uL擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)瓊脂糖電泳，檢測(cè)擴(kuò)增效果，由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短，建議用1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

2.      陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為220bp左右。如果兩個(gè)陰性對(duì)照（樣品制備陰性對(duì)照或PCR陰性對(duì)照）有此擴(kuò)增產(chǎn)物，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3.      如果所有樣品和PCR陽(yáng)性對(duì)照均無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說(shuō)明有系統(tǒng)性的問(wèn)題（試劑、設(shè)備、程序、操作等），需要重復(fù)并排查原因。

       4.      如果沒(méi)有上述兩種情況，則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2個(gè)樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽(yáng)性，無(wú)則判定為陰性。